三重県水稲奨励品種の安定的なＤＮＡ品種判別法

三重県独自育成品種「みえのえみ」、「みえのゆめ」を含む県奨励水稲の10品種について、6種類・2組み合わせのプライマーを用いたＰＣＲによって安定的に識別するＤＮＡ品種判別法を確立した。

　コメの品種判別技術は、すでに「コシヒカリ」、「あきたこまち」等のブランド米については確立されている。しかし、それぞれの県が育成した独自品種については研究対象とされずに残されているものも少なくない。そこで、三重県独自育成の2品種を含む県奨励コメ10品種について、ＤＮＡによる安定した品種判別法を確立する。

１．	ＳＴＳ化対合プライマー（大坪ら、2003年）の組み合わせ（マルチプレックスＰＣＲ）により、ＤＮＡから三重県奨励10品種を互いに判別できる特徴的な識別パターンが得られる（表１）。
２．	コシヒカリポジキット（TaKaRa）のプライマーにより、10品種中7品種が判別できる（図１上）。残り3品種（キヌヒカリ、あきたこまち、どんとこい）については、異なる2種類の対合プライマーの組み合わせにより判別できる（図１下）。
３．	この方法は、微量しか抽出できない精米１粒のＤＮＡからでも品種判別できる。これにより、１粒ごとに分析することで、サンプルとしたコメの品種別の混合割合を推定できる。
４．	精米１粒からのＤＮＡ抽出は、酵素法（大坪ら、2002年）でも可能だが、市販の植物ＤＮＡ抽出キット（Amersham Bioscience社）を使うことで抽出に要する時間を２／３ほどに短縮できる。
５．	精米１粒からのＤＮＡの場合、純度が低いためにうまく増幅しないことがあるが、抽出したＤＮＡを１晩程度放置して十分溶媒に溶かすことにより増幅する（表２）。
６．	抽出したＤＮＡの原液を使って増幅しない場合、10倍程度に希釈した液を使うと増幅することがある（表２）。

１．	三重県独自育成品種「みえのえみ」「みえのゆめ」をはじめ、生産・販売されている県産米の表示の真偽や立毛状態での他品種混入の有無等を検定できる。
２．	本法については、三重県内の民間分析機関に技術移転を行った。
３．	プライマーの種類を増やすことで、全国の主要品種についても判別することができる。

［具体的データ］

研究課題名：三重県特産品に対するＤＮＡ鑑定・品種識別手法の開発
予算区分：県単
研究期間：2003～2004年度
研究担当者：橋爪不二夫