ハタケシメジのDNA系統識別

三重県内で栽培されている主要品種「亀山１号」を含むハタケシメジ10系統について、3種類のRAPDプライマーを用いたPCRによって互いに分類するＤＮＡ系統識別法を開発した。

　近年、農産物の偽装表示や海外への不正流出・再流入が問題となっているが、きのこでDNA鑑定できるものは流通量の多いシイタケ等に限られている。ハタケシメジは抗腫瘍作用等で注目されており、生産量全国2位（53.5t、H15）の三重県では栽培規模が拡大している。しかし、これまでの事例も少ない上に、地域によって異なる系統が栽培、自生しているため、それぞれに手法の開発が必要となる。そこで、三重県内で栽培されている主要品種を含むハタケシメジについて、ＤＮＡ系統識別法を開発する。

１．	反応液は、0.5μM RAPDプライマー（OPERON社）、0.5Unit rTaq polymerase（TaKaRa）、1倍希釈添付Buffer 、0.2mM dNTPs、鋳型DNA約5ngとし、全量を10μLとする。ＰＣＲ反応は94℃2分、（94℃30秒・36℃1分・72℃2分）35サイクル、72℃10分とする。
２．	ハタケシメジ10系統について、RAPDプライマー22種類でPCRすると、8種類のプライマーで、識別が容易な多型を示すマーカーが17個得られる（表1）。
３．	これらのうち、反応数を最少にできるプライマーの組み合わせを用いた場合、ハタケシメジ10系統は3種類のプライマーで検出される7個の多型により識別することができる（表2、図1）。
４．	分析に要する日数は、50検体程度の場合、DNAの抽出に6時間、PCR反応に4時間、電気泳動に2時間ほどで合計1日半ほどである。

１．	三重県の主要栽培種「亀山１号」や今後普及を見込む品種候補「LD99-3」をはじめ、栽培・自生しているハタケシメジについて、生産、流通、販売、消費の各段階で表示の真偽や他系統混入の有無等を検定できる。
２．	判別をより明確化さするため、RAPDプライマーのSTS化が必要である。
３．	さらに多くの識別マーカーを増やすことで、栽培上の品質管理（変異株の検知・除去による優良系統の維持）や系統樹作成による育種目的などに利用できる。

［具体的データ］

研究課題名：三重県特産品の系統判別技術の開発
予算区分：県単
研究期間：2003～2004年度
研究担当者：橋爪不二夫、山本有子