トマトにおけるトバモウイルスの同時検出のためのマルチプレックスPCR法

簡易抽出したRNAを用い、トマトのTMV、ToMVのそれぞれに対応するプライマーを混合したRT-PCR法により両ウイルスを簡易に識別診断できる。

  福井県特産のミディトマトにおいて、種苗供給センターの苗にタバコモザイクウイルス（TMV）およびトマトモザイクウイルス（ToMV）によるウイルス病が発生し、苗の供給前にウイルス診断を行う体制作りが求められた。そこで、ウイルス感染トマトから簡易かつ安価にTMVとToMVを同時検出するマルチプレックスPCR 法を確立する。

１．	TMVおよびToMVのプライマーはDDBJに登録された塩基配列を参考に作製する（表１）。
２．	RNAは、５mm四方に切断した葉を抽出液中に浸してつまようじで数回刺し、遠心操作により簡易抽出する（図１）。本法では、RNA抽出に要する時間は１検体あたり25分である。
３．	上記の簡易抽出RNAと４種類のプライマーを混合して用いたRT-PCR法により、TMVあるいはToMV単独感染トマトおよびTMV・ToMV混合感染トマトから、それぞれのウイルスは412bp、327bpの増幅断片として検出される（図２、３）。

１．	トマトの種苗供給センターなどでTMV、ToMV検定に利用できる。
２．	TMVおよびToMVを同時に検出できるので、１検体あたりのRT-PCR法の費用は安価になる。

［具体的データ］

研究課題名：主要園芸作物に感染するウイルス群の遺伝子診断技術の確立
予算区分：地域科学技術振興
研究期間：2004〜2006年度
研究担当者：渡辺  貴弘、加藤  久晴（福井県立大）、古河  衞、福田  明美