低品質ウシ性判別胚の保存にはクライオトップ法が有効である

クライオトップを用いたウシ性判別胚のガラス化保存において、ストロー内希釈液の組成は受胎率に影響を及ぼし、0.2モルSucroseを添加した希釈液を用いることにより、低品質ウシ性判別胚（Cランク）でも約70％の生存率が得られ、受胎も得られる。

ウシ性判別胚の保存は、ガラス化保存法が一般的に用いられているが、野外普及のためには、農家の庭先で簡便に耐凍剤希釈ができる手法が必要である。超急速ガラス化保存法であるクライオトップ（CT）法^１）はウシ性判別胚の保存法として有効であり、野外で簡易に耐凍剤を希釈できるストロー内希釈法の有効性も報告されている。そこで、ストロー内希釈法に適した希釈液を検討するとともに、今まで保存が困難であった低品質ウシ性判別胚（Cランク）をCT法で保存し、低品質ウシ性判別胚の保存法としてのCT法の有効性を確認する。
^１） kuwayama.M （1998）, J.Assist.Reprod.Genet.,17（8）:477

１．	性判別目的で約10％の細胞を採取後、CT法で保存したウシ性判別胚（A、Bランク）を0.2ＭのSucrose（Suc）を含む20％子牛血清（CS）加D-PBS（38℃に加温）を用いてストロー内希釈（図１）を行うと、56.5％の受胎率が得られる（表１）ことから、本希釈液はCT法のストロー内希釈液として有効である。
２．	CT法で保存した低品質ウシ性判別胚は、0.2ＭのSucを含む20％CS加D-PBS（38℃に加温）を用いてストロー内希釈を行うと、約70％の生存率が得られる（表２）。
３．	CT法で保存した低品質ウシ性判別胚の移植で、33.3％（2/6）の受胎率が得られることから、CT法を用いることにより低品質ウシ胚の性判別利用が可能である（表３）。

１．	低品質ウシ性判別胚（intact胚を含む）の保存法として活用する。
２．	希釈液の入ったストロー内にCTのシート部（胚）を５秒以内に入るよう、手技に迅速性が求められる。５秒以上10秒以内では、受胎例は得られなかった（0/4）。
３．	希釈液を38℃に保温して、実施することが重要である。

研究課題名：低品質受精卵の有効利用技術の検討
予算区分：県単
研究期間：2008〜2009年度
研究担当者：佐野文彦、土屋貴幸（静岡県東部家保）、小柳寿文、小林幸惠、永田浩章（静岡県東部家保）、神尾泰宏