牛体外受精由来胚、核移植胚の発生率及び品質の向上に有効な単純組成培地の検討

［要約］: 牛体外受精由来胚の培養方法を検討し、単純組成培地であるCR1aa及びmSOFの有効性が認められた。また牛核移植胚でも同様の傾向が見られ、これらの培地で、安定的に移植可能胚を生産することができる。

　広島県立畜産技術センタ－  生物工学部
［連絡先］08247- 4-0331 　
［部会名］畜産、生物工学
［専　門］繁殖
［対　象］肉用牛
［分　類］研究

［背景・ねらい］: 　牛胚の体外生産で、発生率を向上させるために卵丘細胞などとの共培養法が多く用いられているが、この方法では培養条件が一定しないこと、牛胚の発育に有効な成分の解析が難しいなどの欠点があり、また、透明帯を切開した体外操作胚では、卵細胞質が圧出されるなど胚生産において支障がある。牛の体外受精由来胚と核移植胚を安定的にかつ、簡便的に発育させるためには、できるだけ単純な条件下で培養を行う必要がある。; 　そこで、非共培養系における、より効果的な牛胚の発生培地の比較試験を行った。

[成果の内容・特徴］

単純組成培養液で牛体外受精由来胚を培養した結果、mTALP 32.7%(56/171)、CR1aa 44.8%(78/174)、mSOF 45.5%(80/176)の割合で胚盤胞期まで発生し、CR1aaとmSOFで有意に高い（表１）。
牛体外受精由来胚の培養７日目の胚盤胞期胚の細胞数について比較したところ、それぞれの培地で、mTALP 79.3±4.3、CR1aa 96.5±6.4、mSOF 88.0 ±3.9となり、CR1aa 及びmSOFはmTALPに比べ細胞数が多い（表２）。
培養７日目の細胞数の分布を比較すると、mTALP及びmSOFでは比較的発育が揃い、一方CR1aaでは細胞数の分布に広がりがみられる。
核移植胚で同様の試験を行った結果、胚盤胞期への発生率は、mTALP 22.2%(12/59)、CR1aa 31.0%(18/59)、mSOF 31.6%(18/58)となり牛体外受精由来胚の結果と同様である（表３）。
CR1aaで培養した牛核移植胚を受胚牛に移植した結果、5頭中3頭の受胎が確認された。

[成果の活用面・留意点］

　体外で培養した牛胚は、体内受精由来胚より細胞活性、細胞数で劣るため耐凍性が低い。

　そのための発育に有効な因子を見いだし、細胞数を含めた牛胚の品質向上を図る必要がある。

［その他］
 研究課題名：体外受精技術実用化試験
 予算区分  ：県単
 研究期間　：平成8年度（平成5年～8年）
 研究担当者：岩水正、尾形康弘
 発表論文等：牛体外受精卵の体外培養における単純組成培地　mTALP、CR1aa、mSOFの比較、
　　　　　 　第42回広島県獣医学会講演要旨、1996.
 　          非共培養条件下での単純組成培養液における牛核移植胚の発生率の比較、
             第7回西日本胚移植研究会講演要旨、1996.
             牛体外受精卵の体外培養における単純組成培地　mTALP、CR1aa、mSOFの比較、
             第39回日本産業動物獣医学会講演要旨（中国）、1996.

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