経膣採卵・体外受精と核移植の組合せによるウシ核移植胚の効率的生産

［要約］: 核移植用のドナー胚として経膣採卵・体外受精胚を用いることで、個体識別可能な受精胚を繰り返し生産することが可能となる。１個のドナー胚から9.8個の核移植胚が生産でき、複数の産子を得ることができる。

広島県立畜産技術センター・生物工学部
[連絡先] 08247-4-0331
[部会名] 畜産
[専 門] 繁殖
[対 象] 肉用牛
[分 類] 研究

[背景・ねらい］: 　ウシの超音波画像診断装置を用いた生体からの採卵により、個体識別可能な未成熟卵子を短期間に反復して簡易に採取することができる。この経膣採卵と体外受精技術の組み合わせによって、効率的にウシ受精胚の作出が可能となる。; 　経膣採卵・体外受精技術を数回繰り返すことで、従来の過剰排卵・胚回収法以上のウシ受精胚生産ができる。さらに経膣採卵・体外受精由来の桑実期胚を核移植用のドナー胚に利用して、短期間に大量のウシ受精胚を生産することが可能である。; 　また、ドナー胚の凍結保存により核移植の効率化が図れる。

[成果の内容・特徴］

ダブルルーメンニードルを用いた経膣採卵で一回あたり13.4個のウシ未成熟卵子を採取できた（表１）。
経膣採卵・体外受精したウシ卵子をCR1aa培地でVero細胞と共培養した結果、6.4個の桑実期胚を作出できた（表１）。
核移植により、ドナー胚あたり、新鮮胚で9.8個（39％）、凍結胚で7.7個（38％）が胚盤胞期胚に発生した（表２、３）。
発生した核移植胚を受胚牛に移植した結果、52％の受胎率が得られた（表４）。
5％エチレングリコール、6％プロピレングリコール、0.1Mシュークロースで凍結したドナー胚からも一卵性複数子が得られた（表４）。

[成果の活用面・留意点］

経膣採卵による未成熟卵子の採取個数は個体差があり、体外成熟個数の差は胚発生に大きく影響する。
凍結ドナー胚を用いた核移植胚の培養は、共培養系を用いた方が胚の発生率が高く、胚盤胞期胚の細胞数も増加する。

[その他］
研究課題名：優良種畜の安定的大量生産技術の開発（クローン家畜生産技術の開発）
予算区分　：地域先端
研究期間　：平成11年度（平成6～13年度）
研究担当者：尾形康弘、今井昭
発表論文等：経膣採卵・体外受精と核移植による受精胚の大量生産、第40回日本産業動物学会（中国）講演要旨、1998.
　　　　　　ウシ経膣由来桑実期胚をドナー細胞とした核移植成績、第6回日本胚移植研究会大会講演要旨、1999.

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