増菌操作及び抗血清反応を利用した青枯病菌の土壌からの検出

〔背景・ねらい〕

　ナス等ナス科作物の青枯病は難防除病害となっており、発生ほ場における汚染土壌の診断は防除上重要となっている。しかし、土壌からの病原菌の検出に際しては、種々の要因により、発生ほ場からでも検出できない場合が多く認められている。そこで、従来から実施されている希釈平板法による菌の分離の前段に、増菌操作を加えることにより検出感度を上げることが可能と考えられるため、希釈平板法と増菌法による検出感度について比較検討する。さらに、選択寒天培地上に形成される青枯病菌の識別が困難な場合も認められるため、増菌液と抗青枯菌血清との反応の有無による検出感度について検討する。

〔成果の内容・特徴〕

1. 青枯病菌の土壌からの検出感度について、現在行われている希釈平板法と増菌法（5ppmのクリスタルヴァイオレット溶液にシクロヘキシミド、ポリミキシンB硫酸塩：50ppm、クロラムフェニコール：10ppmおよびTTC：25ppmを添加（最終濃度）した液体培地を使用し、30℃下で培養）とを比較検討した結果、汚染土壌を直接増菌（選択液体培地9に対して1の土壌を添加し（V/W）、培養）した場合には10² 倍に精度を上げることができる（表１）。
2. 汚染土壌の希釈液を増菌（選択液体培地9に対して1の土壌希釈液を添加し（V/W）、培養）した場合には、希釈平板法と比較して、10³ ～10⁴ 倍に検出感度を上げることができる（表１）。
3. 汚染土壌の10倍段階希釈液に等量の選択液体培地を加え、24～48時間増菌し、その増菌液を抗血清反応（混合法）の有無により、青枯病菌を短時間に検出することが可能となる（表２）。
4. 選択培地上で生育する青枯病菌およびそれ以外の細菌との血清反応試験を検討した結果、褐色の水溶性色素を産生する紅色コロニーのみが反応したことから、選択培地を使用する限りにおいては、抗血清の特異性は高いと推察される（表３）。

［成果の活用面・留意点］

1. 増菌液を選択寒天培地に接種し、そのコロニー形態から青枯病菌を検出する場合、青枯病菌と類似するコロニーがあり、その識別が困難な場合が認められる。
2. そこで、増菌液を用いて、混合法による抗血清反応を利用して検出する場合には、抗血清の特異性が問題となる。現在のところ、選択培地上で生育し、検出される青枯病菌以外の菌が抗血清と反応するものは認めていないが、場合によっては誤診する可能性もあるので、注意が必要である。

［具体的データ］

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