COI領域の変異に基づくハモグリバエ3種の簡易同定法

［背景・ねらい］

　ハモグリバエ類、特にマメハモグリバエLiriomyza trifolii、トマトハモグリバエL. sativae、ナスハモグリバエL. bryoniae は広範囲の農作物に被害を及ぼしている。これら3種は雌成虫や幼虫での形態的識別は困難なため、発生消長や動態の詳細な解析が難しく、的確な防除に支障をきたしている。そこで、遺伝子マーカーによるハモグリバエ3種の同定法を確立する。

［成果の内容・特徴］

1. 0.2mlのサンプルチューブにハモグリバエを個体別に入れ、磨砕液30μl（1M Tris-HCl、0.5M EDTA、5N NaCl、Chelex）中でプラスチック爪楊枝により磨砕し、Proteinase Kを 2μl 加えて56.0℃で2時間以上、続いて99.9℃で3分処理した抽出液をPCR法に用いる（1μl/反応）（図１）。この方法で微小な個体に対して効率的にDNA解析を行うことができる。
2. マメハモグリバエ、トマトハモグリバエおよびナスハモグリバエの3種ではCOI領域（約600bp）の塩基配列の解析結果において、複数の塩基配列に差異がある。それらの差異を利用し3種を識別可能なプライマーを設計する（図２）。
3. TaKaRa社製の簡易PCR用試薬（PerfectShotTMExTaq）の0.2mlのサンプルチューブに4つのプライマーを入れ滅菌水で50μlにする。それをPCR用器械で92℃で1分、50℃で1分、72℃で1分30秒35回繰り返す。そのサンプルを1%のアガロースゲルの電気泳動法により、トマトハモグリバエでは3本（約600bp、約400bp、約200bp）、マメハモグリバエでは2本（約600bp、約200bp）、ナスハモグリバエでは1本（約600bp）のバンドが検出される（図３）。したがって、バンドの位置や数により3種のハモグリバエを容易に区別できる。この方法で各地のハモグリバエが判別可能であることを確認した。また、卵から成虫までの各ステージで判別が可能である．

［成果の活用面・留意点］

　各地圃場に発生しているマメハモグリバエ、トマトハモグリバエおよびナスハモグリバエが区別できるため、害虫管理に広く活用できる。

［具体的データ］

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