牛体外受精滑胚及び未受精卵子の効率的凍結保存法

［要約］

　

体外受精胚をEFS・GFS（ガラス化溶液）で超急速凍結しても高率に生存胚が得られる。また、受精前の卵子（未受精卵）でも1.6Mプロピレングリコール（耐凍剤）を用いて凍結保存すると低率ながら生存卵子が得られる。これらの新技術は凍結操作の簡易化及び雌側からの改良に役立つ。

    　徳島県畜産試験場・肉牛科
        ［連絡先］0884-22-2938
        ［部会名］畜産、生物工学
        ［専門］繁殖
        ［対象］家畜類
        ［分類］研究

［背景・ねらい］

受精卵において、今までの凍結保存技術は高額な凍結保存機器並びに煩雑な操作を必要とするため、低コストでかつ簡易化が求められている。一方、受精前の卵子の凍結保存が可能となれば、体外受精技術を利用することにより世代を越えた交配が可能となり、凍結精液による雄側からの改良のみならず凍結卵子による雌側からの牛の改良ができ、牛群改良のスピードアップが期待できる。そこで、受精卵の簡易的なガラス化凍結保存方法の開発、並びに未開発な未受精卵子の凍結保存方法を検討した。

1. EFS（40％エチレングリコール、18％フィコール、0.3Mシュークロース）で凍結した胚の生存率は平衡時間1、2分区で高く（77.74％）、GFS（40％グリセリン、18％フィコール、0.3Mシュークロース）では全平衡時間区において生存胚が得られ、中でも4分区が72％で最も高い値を示した（図1）。
2. EFS及びGFSにより凍結融解後移植（2胚）した14頭のうち合計10頭が妊娠し、６頭が分娩した。
3. 成熟前の卵子を0.2M以下のシュークロース含む1.6Mプロピレングリコールで凍結保存した場合（冷却速度0.3℃／分、液体窒素投入温度－30℃）、融解後成熟培養及び体外受精することにより、低率（0.6～2.2％）ではあるが移植可能な胚盤胞期胚が発生し（図2）、発生した胚の移植により1頭の子牛を得た。
4. 凍結保存剤として1.6Mプロピレングリコールを用い成熟卵子を凍結した場合、1.0℃／分以下の冷却速度（液体窒素投入温度－30℃）では融解後の発生能に影響しない（表1）。また、凍結融解成熟卵子から体外受精後発生した胚盤胞期胚の移植により2頭の子牛を得た。