豚15豚07029427豚91豚31180豚012豚01200豚140豚1009000 付記：本稿で記載された研究は、農林水産省委託プロジェクト研究「安全な農畜水産物安定供給のための包括的レギュラトリーサイエンス研究推進委託事業（官民・国際連携によるASFワクチン開発の加速化）」（JPJ008617.20319736）の研究成果です。本検査法の開発ならびに製品化はタカラバイオ株式会社との共同研究、研究試料は都道府県の家畜保健衛生所からの提供を受け実施されました。■ おわりに※2 検出感度 検査において、陽性と判定されるべきものを正しく陽性と判定する確率。※3 特異度 検査において、陰性のものを正しく陰性と判定する確率。参考文献̶1）農林水産省. https://www.maff.go.jp/j/syouan/douei/csf/domestic.html （参照 2024-2-19）2）Blome, S. et al. （2013） Pathogenesis of African swine fever in domestic pigs and European wild boar. Virus Research, vol.173（1）, 122-130.3）Tautz, N. et al. （2015） The molecular biology of pestiviruses. Advances in Virus Research, vol.93, 47-160.4）Liess, B. and Moennig, V. （1990） Ruminant pestivirus infection in pigs. Revue Scientifique et Technique, vol.9（1）, 151-161.5）Vilcek, S. et al. （1994） Pestiviruses isolated from pigs, cattle and sheep can be allocated into at least three genogroups using polymerase chain reaction and restriction endonuclease analysis. Archives of Virology, vol.136（3-4）, 309‒323.6）Hoffmann, B. et al. （2005） Validation of a real-time RT-PCR assay for sensitive and specific detection of classical swine fever. Journal of Virological Methods, vol.130（1-2）, 36-44.7）Alonso, C. et al. （2018） ICTV virus taxonomy profile: Asfarviridae. Journal of General Virology, vol.99（5）, 613-614.8） 国際獣疫事務局. https://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.08.01_ASF.pdf （参照 2024-2-19）9）Yamada, M. et al. （2021） Experimental infection of pigs with different doses of the African swine fever virus Armenia 07 strain by intramuscular injection and direct contact. Journal of Veterinary Medical Science, vol.82（12）, 1835-1845.10）Kameyama, K. et al. （2019） Experimental infection of pigs with a classical swine fever virus isolated in Japan for the first time in 26 years. Journal of Veterinary Medical Science, vol.81（9）, 1277-1284.11）King, D.P. et al. （2003） Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus. Journal of Virological Methods, vol.107（1）, 53-61.12）タカラバイオ株式会社. https://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?catcd=B1000711&subcatcd=B1000787&unitid=U100009519 （参照 2024-2-19）13）Nishi, T. et al. （2022） Establishment of a direct PCR assay for simultaneous differential diagnosis of African swine fever and classical swine fever using crude tissue samples. Viruses, vol.14（3）, 498. https://doi.org/10.3390/v14030498 ASFV検出従来法CSFV検出従来法ASFV検出従来法CSFV検出従来法用語解説̶※1 PCR 遺伝子検査法の一つでpolymerase chain reaction法の略称。標的とする遺伝子領域を挟むように一組の短い一本鎖DNA（プライマー）を設計し、これを起点にして耐熱性のDNA合成酵素を反復して作用させることにより標的遺伝子を試験管内で合成、増幅する。開発したCSFVおよびASFV遺伝子検出検査リアルタイムPCR法の検出感度および特異度の評価血清試料核酸抽出精製＋リアルタイムPCR核酸抽出精製＋コンベンショナル逆転写PCR臓器乳剤核酸抽出精製＋リアルタイムPCR核酸抽出精製＋コンベンショナル逆転写PCR新規検査法（核酸の簡易抽出およびマルチプレックスリアルタイムPCR）イノシシ陽性陰性イノシシ陽性陰性362新規検査法（核酸の簡易抽出およびマルチプレックスリアルタイムPCR）イノシシ陽性陰性イノシシ陽性陰性140ASFV 陽性イノシシCSFV 陽性イノシシASFV 陽性イノシシCSFV 陽性イノシシASFV 陰性検出感度100% （18/18）CSFV 陰性検出感度98.6%（70/71）ASFV 陰性検出感度CSFV 陰性検出感度100%（24/24）特異度97.1%（34/35）特異度91.9%（34/37）特異度100%（23/23）100%（12/12）特異度100%（12/12）表1NARO Technical Report ／No.15／202413（動物衛生研究部門 越境性家畜感染症研究領域 海外病グループ）特集 アニマルサイエンス ■（タカラバイオ株式会社の手順書に詳細が記載）か、適切なキットなどを用いて核酸を精製した後に再度本検査に供する、といった対応をすることで改善される場合があります。また、可能であれば溶血や混濁のない新鮮な血清を改めて採取し直して検査に用いることが推奨されます。 今回我々が新たに開発した検査法は、国が定める防疫指針の診断マニュアルに記載される「遺伝子検出検査」に活用できるだけでなく、簡便で迅速にウイルス遺伝子を検出できることから、従来のPCR法に代わる検査技術として、国や都道府県の病性鑑定施設での利用を通じて国内への侵入が懸念されるASFの侵入防止や早期摘発、CSFの効率的な検査ならびに防疫措置の実施に貢献するものと期待されます。
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