動物型および植物型スフィンゴ糖脂質の簡易判別法

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要約

由来生物により異なる構成糖をもつ動物型、植物型のスフィンゴ糖脂質を、アニスアルデヒド硫酸を用い発色させることにより、視覚的に構成 糖ならびにその由来の判別が可能である。これにより以前の主たる原料であった牛脳由来の動物型と植物、酵母由来の植物型スフィンゴ糖脂質を迅速、簡易に判別できる。

• キーワード:スフィンゴ糖脂質、アニスアルデヒド硫酸、薄層クロマトグラフィー
• 担当:北農研・畑作研究部・流通システム研究チーム
• 連絡先:電話0155-62-9280、電子メールk.saito@affrc.go.jp
• 区分:北海道農業・流通利用
• 分類:技術・普及

背景・ねらい

スフィンゴ糖脂質は、図1に 示す構造の複合糖脂質で、セラミド、セレブロシドとも呼ばれる。従来、これらスフィンゴ糖脂質の主な供給源は牛脳であったがBSEの発生以降、人体にとっ てより安全な植物、酵母を原料とした製造に切り替わりつつある。構造的には、牛を代表とする動物型の場合はガラクトースを、植物または微生物などの植物型 ではグルコースを構成糖として有し、その分析はスフィンゴ糖脂質を構成糖などの各成分に分解後、成分ごとにHPLC法などで分析されている。しかしこの方 法では分析に時間を要し迅速な判別ができない現状にある。そこで動物型および植物型スフィンゴ糖脂質の迅速、簡易な判別法の提供を試みた。

成果の内容・特徴

• 試料をシリカプレートにスポットし、アニスアルデヒド:硫酸:エタノール=1:1:18の発色試薬を噴霧し80～120℃程度で加熱することで、各糖質、構成糖に応じた発色を生じ視覚的な判別が可能である(表1)。
• 試料中各分子種の判別や、クロロホルム-メタノール混液より抽出した脂質粗抽出物を試料とした場合も、薄層クロマトグラフィーと組み合わせることで判別が可能である(図2)。
• 多検体の試料も、発色のみであれば数十分、粗抽出や薄層クロマトグラフィーなどの操作を含めても半日以内に、スフィンゴ糖脂質の構成糖の判別ならびに動物型、植物型の判別が可能である。

成果の活用面・留意点

• スフィンゴ糖脂質の製造、品質管理に適用可能である。
• 気温など発色環境などにより発色色調にロット差が生じるため、標準品の発色を毎回同時に行い標準品との比較により試料の判別を行う。
• 混合試料の場合、標準品とは異なる混合比率に応じた色調を生じる。この場合薄層クロマトグラフィーなどにより分離したのち発色、判別を行う。

具体的データ

その他

• 研究課題名:好アルカリ発酵微生物の機能解析とその利用、セレブロシド及び関連脂質高蓄積酵母の分子育種による作出
• 課題ID:04-04-04-*-04-03、04-04-04-*-09-03
• 予算区分:科振調(若手任期付支援)、新事業創出
• 研究期間::2001～2003年度、2002～2006年度
• 研究担当者:斎藤勝一、高桑直也、小田有二
• 発表論文等: 1) 斎藤ら (2003) 特願2003-063181