Streptococcus suis遺伝子ノックアウト用温度感受性ベクターの構築

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要約

豚レンサ球菌Streptococcus suisの遺伝子を効率よく破壊するための温度感受性ベクターを開発した。また,作製したベクターを用いてS. suisのsly遺伝子を破壊することによって,その有用性を実証した。

キーワード:豚レンサ球菌,Streptococcus suis,温度感受性ベクター,遺伝子破壊,sly遺伝子
担当:動衛研・感染病研究部・病原細菌研究室
連絡先:0298-38-7743
区分:動物衛生
分類:科学・普及

背景・ねらい

これまでS. suisで遺伝子破壊株を作製する際は,pUC19の様なグラム陽性菌内では複製が出来ないベクターを用いていた。しかし,この方法で遺伝子破壊株を得るためには,効率の良い遺伝子の導入系が必要であるため,S. suisでは応用できる株が限られる。そこで,形質転換の効率に拘わらず高率に目的の遺伝子を破壊するための温度感受性ベクターを作製し,その応用を試みた。

成果の内容・特徴

pG+host3の温度感受性(Ts)replication origin(ori)に抗生物質耐性遺伝子(catまたはspc),MCSを含むlacZ’遺伝子,およびE. coli内では培養温度に拘わらず複製が出来るようにColE1プラスミドのoriを付加した3種のベクターpSET4s, pSET5sおよびpSET6sを作製した (図1)。
今回使用したTs oriはS. suis内だけでなくStreptococcus equi subsp. equi, S. equi subsp. zooepidemicus,およびStreptococcus dysgalactiae内においても37°Cではプラスミドの複製が阻害されることが確認された (表1)。
pSET4sを用いて,S. suisのコレステロール結合型細胞障害毒素をコードするsly遺伝子の大部分をクロラムフェニコール耐性遺伝子(cat)に置き換えた株(SLY1株)を作製することに成功した (図2)。また,培養上精の溶血活性を調べることにより,この株がS. suis sly遺伝子破壊株であることを証明した表2)。