畜産環境試料からのクレブシエラ属細菌検出用選択培地BIND

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要約

クレブシエラ(Klebsiella)属細菌による乳房炎は深刻な乳牛の疾患の一つである 。そこで、敷料、堆肥等の畜産環境試料からクレブシエラ属細菌を簡便かつ選択的に検出する ための選択培地を開発する。

• 担当:草地試験場・生態部・土壌微生物研究室
• 連絡先:0287(37)7227
• 部会名:生産管理
• 専門:環境保全
• 対象:乳用牛
• 分類:普及

背景・ねらい

乳房炎は酪農経営上重要な乳牛の疾患の一つであり、中でもクレブシエラ(Klebsiella)属細 菌による乳房炎は深刻である。しかし、種々雑多な菌を 含む牛ふん尿や牛舎敷料などの畜産環境試料からクレブシエラ属細菌を簡便かつ選択的に検出 ・定量する方法は現在までに確立されていない。そこで新たにクレ ブシエラ属細菌検出用の選択培地の開発を行う。

成果の内容・特徴

• 新規合成培地BINDは、イノシトールおよび硝酸ナトリウムをそれぞれ単一の炭素源・窒素 源として用い、デオキシコール酸及びブリリアントグリーンを夾雑菌の増殖抑制剤として用い ている

  (表1) 。

• 本培地を作成する際には硫酸マグネシウム、デオキシコール酸、ブリリアントグリ ーン及び寒天を除いた培地成分を20倍の濃厚液 として準備する(20x BIND濃厚液)。硫酸マグネシウム、デオキシコール酸、ブリリアントグリーンはそれぞれ別々 に濃厚液を作成し、培地調製時に添加する。これらはすべて濾 過滅菌しておく。BIND培地は生育抑制が強いので、30 ゚C、2晩(42時間)以上の培養を行う 。
• 本培地によって、従来の選択培地では困難であった、牛舎敷料からのクレブシエラ 属細菌の分離が容易に行える

  (図1) 。クレブシエラ属細菌は本培地上で白色～淡青色で盛り上がった形状のコロニーを形成する。 バックグラウンドに痕跡程度の小さいコロニーあるいは透明で平たい形状のコロニーが形成さ れることがあるが、これらの菌は、いずれもクレブシエラ属ではなく、容易に判別できる。

成果の活用面・留意点

• 本培地はクレブシエラ属細菌全般用の簡易分離同定に適しており、本菌による乳房炎の予 防対策に活用できる。
• 20x BIND濃厚液は長期保管すると黄色を帯びることがあるが、これによる品質の劣 化はこれまでのところ認められていない。また低温で保管すると結晶状の沈殿を生ずるが、こ のときは穏やかに加熱し完全に溶解させてから使用する。
• 敷料・堆肥等の菌数計数の場合は、ワーリングブレンダー等を用い試料と希釈液を よく混合し、その後、常法に従って希釈し、希釈液を平板へ塗抹する。

具体的データ

その他

• 研究課題名:家畜排泄物の敷料等利用技術の開発
• 予算区分 :環境研究(家畜排泄物)
• 研究期間 :平成11年度(平成9年～11年)
• 研究担当者:大友 量、斎藤雅典