マクロファージからのロイコトリエンB4産生を抑制する乳酸菌の簡易検索法

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要約

炎症反応を引き起こすロイコトリエンB₄の産生を抑制する乳酸菌の検索に使用できる。当該方法は培養細胞を用いており、動物・ヒトから採取した白血球を用いる従来法よりも簡便である。

• キーワード:プロバイオティクス、乳酸菌、抗炎症、ロイコトリエンB₄
• 担当:畜産草地研・畜産物機能研究チーム
• 代表連絡先:電話029-838-8688
• 区分:畜産草地
• 分類:研究・普及

背景・ねらい

ロイコトリエンB₄(LTB₄)は生体恒常性維持などの生体調節機能を持つ重要な物質であるが、過剰に生産されると炎症反応を引き起こし、炎症性腸疾患などの原因になるとされている。これまでLTB₄産生を抑制する物質の検索においては、動物・ヒト(ドナー)からLTB₄産生細胞を採取して行なわれてきたが、操作が煩雑であり、ドナーの状態により結果が異なる可能性が指摘されている。近年、乳酸菌による生理的効用(プロバイオティック機能)について世界的に関心が高まってきている。そこで本研究では容易に入手できる培養細胞を用い、乳酸菌を被験物質として、LTB₄産生抑制活性の簡易検索法を開発することを目的とする。

成果の内容・特徴

• BALB/cマウス由来マクロファージJ774.1株(アメリカンタイプカルチャーコレクション TIB67、理化学研究所バイオリソースセンター J774.1)を5×10⁵/mlで播種し、10%ウシ胎児血清(FCS)-RPMI1640培地(100 U/mlペニシリン、100 μg/mlストレプトマイシン、0.5μM 2-メルカプトエタノール添加)で2日間培養後、乳酸菌(生菌、1mgまたは5 mg/ml)を、カルシウムイオノフォアA23187(20 μg/ml エタノール)存在下で共培養し、培養2-3時間後の培養上清中のLTB₄量を測定する(図1)。
• 汎用されている培養細胞株を用いてもマクロファージからのLTB₄産生を確認できる(図2)。カルシウムイオノフォア無添加の場合、LTB₄産生は検出されなかった。
• 供試した乳酸菌7株について、菌株により差はあるものの5mg/ml添加では、供試したすべての乳酸菌にマクロファージからのLTB₄産生抑制活性が見られる(図2)。

成果の活用面・留意点

• ドナーを必要としない簡便なLTB₄産生抑制活性を有する乳酸菌の検索法として利用できる。
• 乳酸菌以外の物質についても簡便なLTB₄産生抑制活性測定法として応用が見込まれる。
• J774.1以外の培養細胞株については、実験条件の検討が必要である。
• 選抜された乳酸菌の抗炎症作用の実証には、生体での効果の検証が必要である。

具体的データ

その他

• 研究課題名:プロバイオティック乳酸菌等を活用した機能性畜産物の開発
• 中課題整理番号:312d
• 予算区分:基盤、委託プロ(食品)
• 研究期間:2006～2009年度
• 研究担当者:木元広実、鈴木チセ、小林美穂、佐々木啓介、水町功子
• 発表論文等:Kimoto-Nira et al. (2009) Int J Food Microbiol. 129:321-324