品種識別のためのDNAの簡易、迅速、安価、多検体抽出法

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要約

イチゴ等の野菜、緑茶、冷凍エダマメからグラスファイバーを装着した96ウェルプレートを用いて3時間以内に192検体のDNAが安価に抽出できる。抽出したDNAは品種識別に使用可能である。

キーワード:イチゴ、緑茶、DNA抽出、品種識別、グラスファイバー
担当:野菜茶研・機能解析部・遺伝特性研究室
連絡先:電話050-3533-3863、電子メールssmats@affrc.go.jp
区分:野菜茶業・野菜育種
分類:技術・参考

背景・ねらい

育成者権の保護や偽装表示防止のために、DNAマーカーを用いた品種識別技術が実用化されているが、DNAの抽出については簡易、迅速、安価で多検体の処理が求められている。特にイチゴの葉、ガク、果実のように多糖類が多く含まれている場合、CTAB法など汎用されている方法ではDNA抽出が困難であり、抽出操作やコスト面から改善すべき点が多い。そこでDNAを吸着できるグラスファイバーが付いた96ウェルプレートを用いて、DNA抽出の効率化を図る。

成果の内容・特徴

192(96ウェルプレート2枚分)検体の粉砕からDNA抽出までの所要時間は、3時間以内である(図1、図2)。1検体あたりの抽出に要する試薬コストは約50円であり、市販品の1/5から1/10である。また本抽出法はフェノールやクロロホルムを使用しない。
20～40mgのイチゴ成葉、ガクと100mgのイチゴ果肉から、イチゴの成葉では0.7μg、ガク0.4μg、果肉0.1μg程度のDNAが抽出可能である(表1)。また仕上げ加工した緑茶や調理した冷凍エダマメからもDNAが抽出できる(表1)。
イチゴ成葉、ガク、果肉から本方法により抽出したDNAをPCRの鋳型に用いてイチゴ品種識別用DNAマーカーの増幅が可能である(図3)。